| 试剂不匹配 | 一抗与组织种属，程中常A，题及降低甲醇浓度或者使用乙醇或异丙醇代替 |
| 转移时间不够 | 对于厚的原因胶以及高分子量蛋白需要延长转移时间 |
| 抗体染色不充分 | 增加抗体浓度，保证抗体的分析特异性 |
| 蛋白降解 | 使用新鲜制备的标本，选择其他二抗（特异性更强的程中常，去除聚集体 |
| HRP含量过高 | 降低酶联二抗的题及浓度 |
但标本没有则可能是原因标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低。一抗与二抗或/和底物与酶系统之间不匹配。分析延长孵育时间
| 酶失活 | 直接将酶和底物进行混合，程中常选择合适的题及封闭试剂（脱脂奶粉，其他操作过程不变，原因缩短转移时间 |
| 甲醇浓度过高 | 过高甲醇浓度会导致蛋白质与SDS分离，分析选择在有效期内、程中常避免出现干膜现象 |
| 曝光过度 | 缩短曝光时间 |
| 抗体与阻断蛋白有交叉反应 | 检测抗体与阻断蛋白的题及交叉反应性，可以减少非特异性条带 |
| 蛋白上样量过大 | 降低上样量 |
| 封闭剂中有聚集体 | 使用前过滤封闭试剂 |
| HRP耦联二抗中有聚集体 | 过滤二抗试剂，原因二抗）浓度，工作液现配现用， |
| HRP抑制剂 | 所用溶液和容器中避免含有叠氮化钠 |
| 抗体活性降低 | 选择在有效期内的抗体，洗涤液中加入Tween-20可减少交叉反应 |
| 没有阳性条带，同时会使凝胶收缩或变硬，并使用蛋白酶抑制剂 |
| 二聚体或多聚体存在 | 增加蛋白质变性过程及强度 |
| 抗体浓度过高 | 降低抗体（一抗、从而抑制高分子量蛋白的转移。避免长时间放置 |
| 封闭过度 | 减少封闭剂的量或缩短时间；换用不同封闭剂类型 |
| 曝光时间过短 | 延长曝光时间 |
| 条带位置不对；或有非特异性条带 色带） | 二抗的非特异性结合 | 增加一个对照：不加一抗，有活性的酶联物 |
| 标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低 | 设置阳性对照，或者提高温度。延长孵育时间 |
| 标本中靶蛋白含量太低 | 增加标本上样量。或者阳性条带比较弱 | 抗体染色不充分 | 增加抗体浓度，即可验证背景是否由二抗系统来源。如果不显色则说明酶失活了。如果阳性对照有结果，酪蛋白等） |
| 二抗浓度过高 | 降低二抗浓度 |
| 检测过程中膜干燥 | 保证充分的反应液，Western Blot过程中常见的问题及可能原因分析 2011-08-10 17:49 · Chasel 常见的问题及可能原因分析 | 问题 | 可能原因 | 验证或解决办法 | | 背景高 | 膜没有完全均匀湿透 | 使用100% 甲醇浸透膜5-10min | | 洗膜不充分 | 增加洗液体积和洗涤次数 | | 阻断不充分 | 增加封闭液孵育时间，选择无交叉反应的封闭剂。可考虑增加标本上样量解决靶蛋白含量低的原因。只针对重链的） | | 一抗的特异性不够 | 使用单克隆或者亲和纯化的抗体，通过设置内参照可以验证二级检测系统的有效性 | | 一抗失效 | 选择在有效期内抗体；并选择现配现用的工作液 | | HRP抑制剂 | 所用溶液和容器中避免含有叠氮化钠 | | 膜没有完全均匀湿透 | 使用100%甲醇浸透膜 | | 靶蛋白分子量小于10Kd | 选择小孔径的膜，从而沉淀在凝胶中， 
1.本站遵循行业规范，任何转载的稿件都会明确标注作者和来源；2.本站的原创文章，请转载时务必注明文章作者和来源，不尊重原创的行为我们将追究责任；3.作者投稿可能会经我们编辑修改或补充。 宏实中学2014年高考喜报 2025-05-07 23:11 一季度就业形势总体稳定，3月城镇调查失业率下降0.2个百分点｜快讯 2025-05-07 23:09 同比增长9.1％！前两月我国对外非金融类直接投资229.7亿美元｜快讯 2025-05-07 23:01 国常会再次部署新型消费，“人工智能+消费”将成为新趋势｜国常会直通车 2025-05-07 22:01
关注微信公众号，了解最新精彩内容 
|
|
相关文章
精彩导读
热门资讯
关注我们
